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冻存袋注意事项

1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80~90%致密度。

冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有antibody之产生。

2.细胞在液氮中可长期冻存没有时间限制，而不会影响细胞活力﹔在-70度可保存数月。注意冷冻保护剂之品质。

DMSO应为***级等级，无菌且无色是直接购买无菌产品，以5~10m1小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。

3.冻存细胞数量要足够。无论再怎么小心，细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以，一开始冻存细胞的数量要足够。一般要达到5× 10^6 /毫升，一瓶不够两瓶凑。但是，这个不能一概而论。有些细胞，比如杂交瘤细胞，只需要1-3x 10^6 /毫升

细胞冻存步骤

1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;

2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;

3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，

为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存

冻存采血袋的优点

采血袋通过连接导管与一三通管相连;所述一三通管的三个孔设置方向为两个并列相反,一个向下方向,分别连接采血袋;第二三通管和转移袋;所述第二三通管的三个孔分别连接转移袋,细胞培养袋和细胞冻存袋;所述采血袋上设置有阻塞件,所述阻塞件由PVC套管和PC折芯组成;所述采血管;一三通管的主管和支管,第二三通管的主管和支管均设有止流夹.本实用新型提供的用于细胞培养的冻存袋从采血到所需成分冷冻保存一步到位减少了成分污染,保障了成分质量要求.

细胞冻存的研究

细胞培养和保种技术广泛用于生命科学研究的各个领域，如研制、人工和再生***等。冷冻保存是目前细胞长期保存的通用方法，有利于降低细胞被微生物污染和细胞之间交叉污染的风险，并且能够减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变，避免有限细胞系出现***或转化。然而，细胞的冻存和复苏过程会对细胞造成较大损伤，降低细胞膜中的脂质含量，产生过氧化，同时影响细胞的结构和代谢途径[1-3]。